多克隆抗體制備相較于單克隆抗體的生產(chǎn)流程,多克隆抗體無需復(fù)雜的雜交瘤技術(shù)或細(xì)胞培養(yǎng)步驟,實(shí)驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)單快捷,大大降低了生產(chǎn)成本和時(shí)間投入。能同時(shí)與抗原上的多個(gè)表位結(jié)合,提高了檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏度和準(zhǔn)確性。這一特性使其在免疫沉淀、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定等實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出色,能夠有效捕獲低濃度的目標(biāo)分子。
多克隆抗體制備時(shí)的注意事項(xiàng):
1.儲(chǔ)存條件:應(yīng)保存在低溫環(huán)境下(如4℃或-20℃),避免反復(fù)凍融導(dǎo)致活性下降。長(zhǎng)期不用時(shí)建議分裝保存,減少開蓋次數(shù)以防污染。
2.封閉與洗滌:在使用多抗進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),需用5脫脂奶粉或BSA充分封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),并通過加強(qiáng)TBST洗滌來降低背景噪音。這是由于多抗易產(chǎn)生較高的背景信號(hào),影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3.工作濃度優(yōu)化:不同批次或來源的多抗可能存在差異,因此在使用前應(yīng)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),摸索出工作濃度范圍。過高或過低的工作濃度都可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
4.交叉反應(yīng)檢查:盡管已經(jīng)過特異性驗(yàn)證,但在實(shí)際使用中仍需注意潛在的交叉反應(yīng)問題。特別是在復(fù)雜的生物樣品中,可能存在與其他分子相似的結(jié)構(gòu)域?qū)е录訇栃越Y(jié)果的情況。因此,建議設(shè)置適當(dāng)?shù)膶?duì)照實(shí)驗(yàn)以排除這種可能性。
5.避免反復(fù)凍融:反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體結(jié)構(gòu)的破壞和活性的損失,因此在使用過程中應(yīng)盡量避免這種情況的發(fā)生。如果必須多次使用同一份抗體溶液,可以考慮將其分成小份保存。
6.注意有效期:即使是在理想的儲(chǔ)存條件下,多克隆抗體也有一定的有效期限制。過期后的抗體可能會(huì)失去活性或發(fā)生降解,因此在使用前應(yīng)檢查其有效期并遵循生產(chǎn)商的建議。