miRNA的檢測

Real-time PCR方法克服了由于miRNA分子太短（~22 nt）帶來的定量最大難題而引入靶向特異性的反轉(zhuǎn)錄引物，該RT引物可以與成熟miRNA結(jié)合，形成反轉(zhuǎn)錄引物/成熟miRNA復(fù)合物，并在miRNA的5’末端延伸。這樣就得到一個(gè)較長的反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增因子，為進(jìn)一步做實(shí)時(shí)定量PCR提供了符合要求的摸板。

檢測流程與原理：

提供樣品：

請?zhí)峁┬迈r且足量的樣本，組織>100~200 mg，RNA模板/DNA模板>5 μg；

提供信息：

待測miRNA名稱；詳細(xì)的背景資料：樣本來源、豐度、相關(guān)文獻(xiàn)等；

?交付成品：

設(shè)計(jì)合成的熒光標(biāo)記引物探針等實(shí)驗(yàn)材料；

?交付報(bào)告：

詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告、標(biāo)準(zhǔn)曲線、擴(kuò)增曲線、溶解曲線、軟件分析結(jié)果。