T載體又叫T質粒載體，是指T4噬菌體DNA連接酶，作用是在有Mg2 、ATP存在的連接緩沖系統中，將分別經酶切的zd載體分子與外源DNA分子進行連接。

DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能，而且T4噬菌體DNA連接酶還有一種大腸桿菌DNA連接酶沒有的特性，即能使兩個平末端的雙鏈DNA分子連接起來。

T4噬菌體DNA 連接酶催化DNA 連接反應內分為3 步：首先，T4 DNA 連接酶與輔因子ATP形成酶-ATP復合物；然后，酶-ATP復合物再結合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后產生一個新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。連接反應通常將兩個不同大小的片斷相連。

形象的說，DNA水解酶相當于剪刀，剪斷DNA，而T載體容（DNA連接酶）就相當于針線。如果克隆時不用，就不能將DNA連接起來。

T載體是聚合酶鏈反應產物的克隆運載體，線性化后兩側3′端各多出一個脫氧胸苷酸(T)。由于PCR產物兩側3′端通常含單個脫氧腺苷酸(A)，與T載體之間的A-T互補性可提高PCR產物克隆的效率。