噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺(tái)

M1 3單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用*泛的文庫展示系統(tǒng)，通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體llI蛋白融合表達(dá),使之參與噬菌體組裝,并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫,針對(duì)特定靶分子進(jìn)行3- 5輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體，得到相應(yīng)的DNA序列信息.

艾柏森生物目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺(tái)涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個(gè)性化文庫,并提供靈活高效的篩選服務(wù)。

噬菌體展示服務(wù)簡(jiǎn)介

M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用*泛的文庫展示系統(tǒng)，通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體plII蛋白融合表達(dá),使之參與噬菌體組裝,并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫,針對(duì)特定靶分子進(jìn)行3- 5輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體，得到相應(yīng)的DNA序列信息。

艾柏森生物目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺(tái)涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個(gè)性化文庫,并提供靈活高效的篩選服務(wù)。

艾柏森生物平臺(tái)系統(tǒng)主要包括pComb3噬菌體展示系統(tǒng)和pCANTAB5e噬菌體展示系統(tǒng):

★pComb3噬菌體展示技術(shù)流程

1>抗體基因庫的獲得:收集目標(biāo)抗體宿主的免疫細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA;反轉(zhuǎn)錄后，使用多對(duì)引物分別擴(kuò)增VH-CH1抗體基因片段和VL-CL1抗體基因片段; .

2>抗體基因庫轉(zhuǎn)化大腸桿菌:將以上擴(kuò)增的抗體基因庫連接至pComb3質(zhì)粒，隨后電轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL12 Blue;同時(shí)鑒定基因庫庫容(及抗體基因的插入率) ;

3>噬菌體Fab抗體庫的構(gòu)建:將輔助噬菌體VCSM13加入到轉(zhuǎn)入了抗體基因的，生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的大腸桿菌中進(jìn)行噬菌粒拯救;培養(yǎng)過夜后,離心收集上清即獲得噬菌體Fab抗體庫;

4>抗體庫的滴度測(cè)定:取少量上述獲得的噬菌體Fab抗體庫,梯度稀釋后進(jìn)行噬斑培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),觀察噬斑生長(zhǎng)情況以判斷噬菌體F ab抗體庫的滴度;

5>噬菌體抗體庫的富集篩選:使用靶標(biāo)抗原包被酶聯(lián)板,加入噬菌體抗體進(jìn)行孵育,隨后進(jìn)行洗板、洗脫;將洗脫下來的噬菌體抗體進(jìn)行中和后，再次感染細(xì)菌，并進(jìn)行第二輪的淘洗;共進(jìn)行3輪淘洗,每輪洗脫后都進(jìn)行滴度測(cè)定; 最后-輪篩選時(shí),設(shè)BSA包被的對(duì)照組以確定是否富集了大量抗BSA的噬菌體抗體。

圖1 pComb3噬菌體展示技術(shù)流程

圖2噬菌粒載體pComb3遺傳圖譜

圖3輔助噬菌體VCSM1 3遺傳圖譜